作者aggaci (Desperado)
看板Biotech
标题Re: 请问ligation check
时间Tue Aug 22 19:54:03 2006
※ 引述《Duckhunter (Duckhunter)》之铭言：
: 是有专门给GC rich序列使用的 PCR polymerase
: 不过那会比你用限制脢来的更贵上10倍
: PCR做不出来
: 用限制脢已经是很便宜的方法了
: ※ 引述《[email protected] (来吧~五子棋)》之铭言：
: : 请问一下
: : 大家的ligation check的方法都是什麽?
: : PCR check?digestion check?
: : 我最近clone 1个基因(1.5kb但是GC rich)到pcDNA3上面
: : PCR check都check不到
: : (enzyme应该没坏，因为空的vector有amplifiy的fragment)
: : 挑个几颗去做digestion check，
: : 本来PCRcheck没东西的，digestion check却有......
: : 我是觉得应该有接近去只是PCR没办法做出来.......
: : 不晓得有没有其他的方法可以confirm
: : 因为RE的酵素也是挺贵的！
学长有说一个方法
有用到phenol-chloroform
onernight culture=>离心=>pellet以phenol+chloroform+DNA dye溶解
=>离心=>supernatant 取 15 micro-liter跑电泳
直接看有接insert和空的plasmid size大小
命中率100%...(不过听他说这方法不会有supercoil的问题)
谢谢各位
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.100.165
1F：推 csmceddie:为什麽这方法不会有supercoil的问题阿?? 08/22 23:20
2F：推 ROKEE:rapid screen? 很难用= = 建议还是乖乖抽plasmid 08/23 20:36
3F：→ ROKEE:反正现在plasmid isolation很便宜呐 XDDDD 08/23 20:37