作者ssuny (Cheer up!!!)
看板Biotech
标题Re: 请问ligation check
时间Tue Aug 22 22:59:35 2006
※ 引述《aggaci (Desperado)》之铭言：
: ※ 引述《Duckhunter (Duckhunter)》之铭言：
: : 是有专门给GC rich序列使用的 PCR polymerase
: : 不过那会比你用限制脢来的更贵上10倍
: : PCR做不出来
: : 用限制脢已经是很便宜的方法了
: 学长有说一个方法
: 有用到phenol-chloroform
: onernight culture=>离心=>pellet以phenol+chloroform+DNA dye溶解
: =>离心=>supernatant 取 15 micro-liter跑电泳
: 直接看有接insert和空的plasmid size大小
: 命中率100%...(不过听他说这方法不会有supercoil的问题)
: 谢谢各位
用这个方法时agarose胶的percentage要高一点...不然会分离不出来...
要记得跑control组...不然会不知道怎麽比
此外..我不太清楚这方法是不是有适用於一些特定的host...
我只知道以前作都做的出来...现在到新的实验室後用这方法却都做不出来..
囧囧囧...
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◆ From: 140.120.208.29
1F：推 aggaci:是阿，用这个方法条件是insert不能太短 08/22 23:17
2F：推 sktzy:短的insert可用两端酵素不同的载体 设计成一端酵素如果有 08/23 01:29
3F：→ sktzy:insert 则切不动 所以之後用两种酵素分别check 08/23 01:34
4F：→ sktzy:如果 一个有切动 一个没有 就表示有clone成功了 08/23 01:34