我的protocol如下 1. Fix 50% MeOH, 12% AcOH add 0.154ml 24% H2CO/200mL in hood incubate for more than 1 hour to overnight 2. Wash 50% MeOH Wash 3X 20 minutes 3. Pretreat 0.02% Na2S2O3 thiosulfate solutions should be prepared fresh, save some for step 7. Incubate 1 minute exactly. 4.Rinse ddH2O 3 times 20 seconds 5. Impregnate 0.2% AgNO3 Dilute 2 ml of 20% stock to 200ml, and add 0.231ml 24% H2CO Incubate for 20 minutes, DON'T TOUCH GEL!! 6. Rinse ddH2O 2 times 30 seconds 7. Develop 6% Na2CO3 (200ml) add 0.154 ml 24% H2CO and 4 ml of 0.02% Na2S2O3 Incubate for 10 minutes 这几天我一直试者找出原因... 再过程中也发生一些奇奇怪怪的事情... 首先在某一次...我染成功了!! 而那次我回想与之前有哪些地方不同.. 唯一不同的是..我跑SDS-PAGE时用的running buffer不大一样... 先前我run SDS的内槽用每次需新配的10X->1Xbuffer 而外槽用used buffer! 由於之前学长都是全用新的... 想说由此推测可能是这方面有问题.... 而再下一次...我染的的时候...发生奇怪事情! 就是我染的第一片可以染...可是大概相距约一小时左右染第二片却染不起来.. 而这两片在跑电泳的buffer不一样!一个是用确定以前使buffer可以染的.. 一个是新配的10X(因为10X用完)dillute成1X~ 而由此两次结果我就推测那应该是跑电泳的buffer问题! 因为这次我使用的是两种同样试剂和方法!! but............ 再隔天...我跟学长再做一次染色... 学长的gel是确定可以染的时候用的电泳buffer! 而我故意继续使用我新配的..来跑电泳来染色(想说推测应该是buffer问题) 可是呢...结果竟然我的跟学长的gel都染不起来!! 而当日我再用BSA去跑电泳(buffer依然是我自己那罐新配的)去染色! 结果虽然有一点band出来...但是很淡...算是视同失败...!! 以这情况来看...好像又不是buffer问题才对... 而且以常理来看buffer应该不会影响才对..!! 可是如果推敲是试剂问题... 那之前所发生的"第一片可以染..第二片不能染"的状况又不知道做何解释....... 而如果是试剂问题....我这种情况不知道是哪种世纪出问题的可能性比较大? 现在找资料...大家遇到的问题通常都是background染太深的问题.. 好像几乎没看到像我这样连染都染不到.. background都没有...就跟刚跑完SDS-PAGE一样透明...... 唉~好难搞~ 这次我把问题PO仔细点.... 希望大家甚至有高手可以帮我想想解决~~~~>"< 感激不尽!!! --

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