作者chococracker (巧克力饼乾)
看板Biotech
标题[问题] His-tag的蛋白elute不太下来
时间Fri Sep 8 23:21:56 2006
拜读过前述蛋白表现相关文章
我是用BL21来表现human的His-tag蛋白
1mM IPTG在室温表现三小时
结果也是大部分蛋白在pellet
後来sup的少量蛋白用1M imidazole 去elute下来之後发现resin上面还有很多蛋白
试过pH 4.5的改变电中性方式或高盐或B-ME方式去elute都没效
我怀疑蛋白根本就不只用His-tag去抓住Ni-resin
请问还有其他方式可以得到更多蛋白吗？
另外我试用Takara的chaperone plasmid set去co-expression
是有让sup的蛋白量变多了 但是elute下来的蛋白还含有少量洗不掉的chaperone
而且利用那些蛋白去做EMSA实验发现会影响蛋白的binding能力
我找到一篇paper是关於去除chaperone的方式
http://myurl.com.tw/6qc2
还在考虑该不该花心力去试这个方法
不知道有没有先进试过类似方法 可以提供意见 谢谢
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◆ From: 140.129.74.69
1F：推 ROKEE:一般DNA binding protein可以试试看用heparin column 09/09 01:11
2F：推 Bluecold:wash时加一点detergen or high salt 干扰Chaperone用 09/09 03:25
3F：→ Bluecold:至於一直bind在resin上的protein 或许可加入少许EDTA 09/09 03:26
4F：→ Bluecold:把Ni跟protein一起抓下来 再与Imidazole做dialysis 09/09 03:28
5F：→ Bluecold:去除Ni 只是建议啦 应该是很滥的建议XD 09/09 03:28
6F：推 longy:通常1M去elute不太可能不掉 请问你怎麽确定resin上还有蛋白? 09/09 13:19
7F：推 aggaci:楼上的，这是有可能的！当局部蛋白质浓度太高时就会！ 09/09 18:21
9F：推 chococracker:请问dialysis时加一点点imidazole时可以去掉Ni吗？ 09/10 15:00
10F：推 sezko:请问七楼...多少的浓度称为太高呢...?? 09/14 18:24