作者LBP (幸福已经从指缝间溜走)
看板Biotech
标题[问题] Real-Time的问题(也有PCR的问题)
时间Wed Sep 13 16:25:20 2006
原本我的real-time一直都做的好好的
结果自从有一次跑出来的Ct值忽然很低
之前都在28-30之间
那一次突然变成20上下
我就把real-time的产物拿去跑胶看看是哪里有问题
跑出来的结果发现产物竟然不是single band...
可是当初作real-time之前已经用一般的PCR去跑过
primer应该是没问题的
当初跑出来也都呈现很乾净也很sharp的single band
竟然好像在一夕之间都做不出来了
於是我就回到PCR，想开始逐步找出问题所在
我用的cDNA都是同一批
起初想说先提高annealing的温度
後来怎麽提高都不见改善，想说问题也许在primer
没想到今天把新的primer溶好後开始重P
竟然还是无法做出当初那样的single band
又因为real-time需要一组internal control
本来闭着眼睛都做的出来的internal control
从那一次问题开始後也是无法出现single band
连今天换了新的primer也是一样
唉......好无力....已经P了一个多月
每天晚上一想到第二天的实验又做不出来
就觉得压力好大...心情很不好
我做的是hTERT基因的表现
请问也有人在做这个的吗?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.29.223.38
1F：推 mandible:real-time28-30其实很高ㄟ!准吗??是否有饱和现象?? 09/13 21:34
2F：→ mandible:可看一下Melting Curve!判断primer是否有dimer出现! 09/13 21:35