作者Solow (深水)
看板Biotech
标题Re: [问题] 如何利用萤光显微镜与CCD照fura-2的相片?
时间Thu Sep 14 22:36:15 2006
※ 引述《paua (waiting for good news)》之铭言:
: 我想照的是这种图, 就是有绿色和红色分别代表不同的钙离子浓度
: http://www.moleculardevices.com/pages/software/metafluor_applications.html
: 网站下面有写一些文字, 但我不是很懂, 是不是一定要用两个照相机, 分别去拍照呀?
看你的影像系统是怎样的,做钙离子有两大系统…(目前看到的)
一种是用飞轮,把滤镜疯狂转动,做不同波长的切换,并用CCD同步撷取影像。
让眼睛可以看到两种波长,也可以看到活体的影像,
但有时飞轮和CCD频率会豆不起来,这时请不要骂业务,
因为这是先天的障碍……(想要跟你弹同调…不可能)
或是用Dual Nipkow-disk(尼氏盘),这个也很厉害,因为它会更加疯狂的转动…XDDD
不过它有更重要的功能就是可以看到像钙波这种要很即时的影像。
但你会被吵死,而且很怕他什麽时候会飞出来打到你的头……(←并不会^^b)
最重要的是它贵33……(所以我是买不起的酸葡萄 >o<)
回到原题,另一个比较和平的系统是用分光的方法,个人比较推这个,
你看网站他下面有写Dual-Cam,或Dual-View
这是一种双分光装置,将两种波长的光用半反射镜分开,
所以要用到两颗CCD,最好是同型号的两颗。
到时候再将两张影像叠在一起,这种方法是比较经济,
但你如何证明你这两颗CCD撷取光的能力是一样的?
同一个亮点 a CCD说是70%亮,b CCD说75%亮这就麻烦了,除非校正CCD亮度,
否则你的ratio image永远是错的,但怎麽校正我不知道…(应该可以用软体修正)
另一个方法做Dual-Cam的那一家公司也有出,
分光镜分光之後把不同波长全打在同一CCD上,
把萤幕切成两边,各别显示不同波长,这就解决了CCD亮度校正的问题,
但它的问题是CCD影像边缘会有弯曲现象,听说你在做影像叠合时会有误差……
有一好没两好啦……(最重要的,不要4好)
:
: http://academic.scranton.edu/faculty/GOMEZG2/avianorn.htm
: 这个网页写着, 利用pseudo color的技术(?)
pseudo→假的,伪装→pseudo color→假的颜色→即电脑填色的意思
真实影像大多是用黑白CCD在拍(因为解析度较高),你看的不是实际的颜色。
: 我现在在看的paper (The journal of cell biology, vol.163, p283-293)
: 也有类似的图片, 在材料方法部份说明作者使用inverted epifluorescence microscope
: (Eclipse TE300, Nikon)与CCD camera (Pentamax, Princeton instrument),
: 萤光的部份, 则利用340与380 nm波长激发.
: 我想请问一般萤光显微镜可同时观察到红与绿色吗?
: 还是说要分别利用不同的激发光使散射出不同颜色的光, 再将两张图片合体(?)
: 麻烦请版上的高手帮忙解答这个问题唷 :P 非常感谢啊 ^^
以上,
如有错误的地方请海涵。
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 218.160.51.30
※ 编辑: Solow 来自: 218.160.51.30 (09/14 22:41)
※ 编辑: Solow 来自: 218.160.51.30 (09/14 22:45)
1F:推 paua:非常感谢呀! 不过如此说来, 就一定要有新仪器才能进行罗! 09/14 23:58
2F:→ paua:我会去查共仪是否有此类型仪器的, 再次感谢 ^^ 09/14 23:59
3F:推 Solow:还没听过国内有人有买的,我也很好奇谁有… 09/17 00:16
4F:推 Solow:不过可以问问生医光电类的研究所 09/17 00:28