※ 引述《leondemon (狗狗)》之铭言： : 我是第一次跑SDS-PAGE : 跑PAGE的药剂几乎都是买新的~ : 药品状态如下: : Running Buffer:放了一年的10倍stock(已开封)，跑胶前稀释配置完毕。 : Acry/Bis:放了一年，未开封，一直躺在4度冰箱 : APS:新买药粉，配了1CC，冰在-20冰箱 : TEMED:新买药剂，平时放在阴暗处，瓶子为褐色避光材质。 : SDS:新买药粉，配了10%放在室温 : Tris:新买药粉，配了1.5M(pH=8.8)和0.5M(pH=6.8)放在4度冰箱 : marker:新买，波士顿的protein marker，middle range，Cat NO:PT-PM01 : 目前问题: : 1.我的marker完全没有分层，可是我有放别人的marker，可以看到不同颜色的Band : 是不是我的marker有问题，还是我买错了?(什麽是prestained marker) Prestained marker 是在SDS电泳中已经有颜色的蛋白质片段，不用再另外染色。 非prestained Marker需要再藉由Coomassie Blue等染剂来成色。 所以确定是Prestained好的？ : 2.第一次制胶时，感觉胶体作的不是很好，虽然胶片有凝结，但是tube内的没有 : 後来跟别人借Acry/Bis来重新配，也用自己的Acry/Bis配一管，两管都有凝在Tube : 但是感觉我的凝胶表面不是水平状，但是别人的Acry/Bis配的，表面很平 ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^ Separting Gel表面? 有用水压平？还是不平？ 不过我感觉是制备时没有混合均匀又有渗漏。 我们实验室通常会用50ml tube配好後先盖上盖子mix一下。 然後再loading。 TEMED一定要让他均匀。 : 3.在stacking时，每条lane的dye都会越来越胖， : 随着时间流逝，别人家的marker，band呈梯形状，这样正常吗? 不懂您叙述的意思 : 4.APS粉末能否放在室温?? : 药剂/药品在配置上和保存上有哪些要注意的?? APS粉末，我们家是放室温药柜， 隔壁实验室有放四度冰箱的。都有。 不过APS液体的话，我们是分装放-20(每管100ul) 我习惯做上下层胶的时候，就直接100ul直接Show hand 时间抓的好的话，对我来说这样凝胶快但是还有充足的时间可以loading。 --

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