※ 引述《leondemon (狗狗)》之铭言： : 我是第一次跑SDS-PAGE : 跑PAGE的药剂几乎都是买新的~ : 药品状态如下: : Running Buffer:放了一年的10倍stock(已开封)，跑胶前稀释配置完毕。 : Acry/Bis:放了一年，未开封，一直躺在4度冰箱 : APS:新买药粉，配了1CC，冰在-20冰箱 : TEMED:新买药剂，平时放在阴暗处，瓶子为褐色避光材质。 : SDS:新买药粉，配了10%放在室温 : Tris:新买药粉，配了1.5M(pH=8.8)和0.5M(pH=6.8)放在4度冰箱 : marker:新买，波士顿的protein marker，middle range，Cat NO:PT-PM01 跑SDS-PAGE，我也算是新手 (时间约半年吧！) 我所知道的有限…… : 目前问题: : 1.我的marker完全没有分层 (可以形容一下结果长什麽样子吗？ 或是会有什 麽现象之类的……)，可是我有放别人的marker，可以看到不同颜色的Band : 是不是我的marker有问题，还是我买错了?(什麽是prestained marker) ^^^^^^^^^^^^^^^^^ Pre-stained Marker是指说marker的每一条band (大部份是一种特定的protein)，在制 程中就加以染色，所以在run gel的时候就可以直接以肉眼观察到现在多大 (kDa)的位置 跑到什麽地方之类的……;另一种的Marker就没有做这样的处理，所以一但跑开的话，就 是透明的，需要在跑完的时候用Comassie Blue染色才可以被看见…… : 2.第一次制胶时，感觉胶体作的不是很好，虽然胶片有凝结，但是tube内的没有 : 後来跟别人借Acry/Bis来重新配，也用自己的Acry/Bis配一管，两管都有凝在Tube : 但是感觉我的凝胶表面不是水平状，但是别人的Acry/Bis配的，表面很平 这有没有可能是与Acrylamide/Bis-acrylamide的比例有关，我实验室是买 commercial的，所以不知道；但是我很有兴趣了解……就顺道一起请教了…… : 3.在stacking时，每条lane的dye都会越来越胖， : 随着时间流逝，别人家的marker，band呈梯形状，这样正常吗? : 4.APS粉末能否放在室温?? : 药剂/药品在配置上和保存上有哪些要注意的?? APS的powder，我家是放在室温，泡开的10% APS是放在4℃保存 (10ml用了半年， 目前仍在使用中)。TEMED放置於4℃冷存，我个人的使用方式是分装到Eppondrof中，用铝 箔包好避光，以方便使用 (因为目前用一次，最多不超过15λ)；也有人是直接一整瓶拿 了就用的，见人见智……。 : 麻烦各位前辈帮忙了~ --

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