作者paua (waiting for good news)
看板Biotech
标题Re: [问题] western blotting
时间Fri Sep 22 15:56:06 2006
我也有做P-Akt，但sample与你不同。
我说说我的步骤:
1. fresh cell lysate (收sample之後，马上定量、跑胶)
2. 蛋白质定量後，40-50 ug/lane (小片胶)
3. transfer (semi dry) 15V (30-45min/1 mini gel, 45-60min/2 mini gels)
4. blocking buffer: 5%-milk-in-TBST, 1 hr at room temperature
*
5. 1Ab (1:1000) in 5%-milk-in-TBST, 4 degree overnight
6. wash three times by TBST, 10 min each
7. 2Ab (1:1000) in 5%-milk-in-TBST, 1 hr at room temperature
*
8. same as step 6
9. ECL 1 min
10.压片5-15分钟可见结果
以上
* 注记与你实验中不同之处
p.s. 我的milk的比例很随意，范围在3-5%
※ 编辑: paua 来自: 140.129.61.120 (09/23 02:14)