作者armyguy (～我们就是有分别)
看板Biotech
标题[问题] 请各位大大帮忙
时间Wed Oct 4 00:47:16 2006
请问在PCR的分析方法中
跑gel 时看到的结果是有自己的product, 但也出现primer dimer的情况
尝试过以2倍2倍dilute primer来做, 如5uM, 2.5uM, 1.25uM.......
发现自己的product和primer dimer的强度也随着primer concentration的下降而变弱
那请问要如何改善才可解决primer dimer的问题呢
是否增加annealing temperature 会增加affinity而减少这样的情况
或是延长denature temperature 的时间会不会有帮助呢
以上是我想到的方法
因为primer dimer 会影响定量
我们老师不接受这样的data
我正在烦恼中
请各位强者可以提供我一点点的意见
感激不尽~~~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.129.74.69
1F：推 aggaci:redesign primer 10/04 01:56
2F：推 Solow:提高annealing temperature，或用gradient PCR抓条件 10/04 09:21
3F：推 satantaco:减少cycle数试试 10/04 14:27
4F：→ mandible:可以加DMSO!(破坏hydrophobic interaction)不过建议1F作 10/04 21:31
5F：→ mandible:的作法!!重新设计比较不浪费时间.建议你PO出条件. 10/04 21:32
6F：推 armyguy:因为是在抓条件,所以在95-30s,53-30s,72-30s,40cycle 10/05 00:32
7F：→ satantaco:除分primer Tm低,不然53可以再提高些 10/05 12:27