作者aggaci (学钢琴，左手怎麽那麽笨)
看板Biotech
标题Re: CHIP assay
时间Wed Oct 11 01:17:46 2006
※ 引述《haveacat (有只猫)》之铭言：
最近在做CHIP assay (chromatin immunoprecipitation assay)
negative组别 我是不加抗体 所以正常是沉淀不下DNA
但是最後利用PCR侦测 却一直夹出DNA片段 其他别组加抗体的也有夹出片段
只是negative一直无法很乾净 wash buffer用 TSE-500*3 LiCl*1 TE*3去洗
是否其他人有经验 如何降低non-specific binding
PS: sonication後 DNA片段已到200-1000bp间了
我也照protocal加agarose beads时 混入salmon sperm DNA和BSA
难道还有其它小技巧吗
帮帮解个惑吧????/ 谢谢
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.174.67
※ 编辑: haveacat 来自: 163.15.174.67 (07/26 21:50)
1F：推 Helene:你的blocking怎麽做的 07/27 11:14
2F：推 asapeman:protein A 中要加salmon sperm DNA,就可降低 07/29 20:12
3F：推 asapeman:我打错了,是应该会降低才对呀@@ 07/29 20:16
唉唉 最近也摸到了ChIP，也碰到了跟原PO一样的问题
我用的抗体是确定能做ChIP的
而我的PCR cycle数为25个
做了好几个条件就是无法降低negative control(IgG)的讯号
有没强者可以帮忙一下
p.s 我的blocking condition
0.1 mg ssDNA/ml+1 mg BSA/ml将protein A beads先saturation
Any help and suggestion would be greatly appreciated!! Thanks a lot.
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.100.165
※ 编辑: aggaci 来自: 140.114.100.165 (10/11 01:18)
4F：推 shaline:先将lysate+bead去除nonspecific binding， 10/19 16:48
5F：→ shaline:再将sup.进行ChIP 10/19 16:49