作者mandible (生化...go go go !!)
看板Biotech
标题Re: 请问RT-PCR
时间Wed Oct 25 23:48:27 2006
※ 引述《anidiot (^__________^)》之铭言：
: ※ 引述《elgase (夏生桂和)》之铭言：
: : 要做semi-qPCR事前要先check很多细节,如果能上real-time PCR会比较单纯一点
: 老师是希望在上机之前
: 若能跑gel看到差异还有调好condition再去做real time
: 不过我今天跑了可以看到band
: 接下来应该就会去做real time
: 谢谢大家的意见 ^^
: : 我以前的经验是,如果你RT用的total RNA总量有1ug,actin大概在23个cycle就
: : 可以在胶上看到band,至於interesting gene的band,那就case by case,要看它本
: : 身在tissue内的表现量.
这样跑很累..
因为到Qpcr的system许多问题要考虑
1.primer concentration
2.primer dimer
3.cDNA concentration
4.pcr product molecular weight
不过..我之前也是花了很多时间再跑traditional RT-PCR
建议你可以跑跑看 cycles看看(20-25-30-35 cycles)等等
希望有给你帮助
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