作者paua (waiting for good news)
看板Biotech
标题[问题] 雷射扫描共轭焦显微镜 confocal的样品前处理?
时间Fri Oct 27 02:44:10 2006
哈哈, 不好意思, 问题有点多 :P
我自己之前做过(chamber slide), 样品处理都没什麽问题, 但是这次带着同学做,
竟然出现一些奇怪的问题... 麻烦请大家和我一起想想, 谢谢喔 :)
我知道这应该没有标准答案, 所以想请大家分享一下经验 ^^
1. 种细胞
(1) 细胞不易种匀, 如果我在种细胞过後一个小时再pipetting, 可以让它更均匀吗
(2) 当细胞贴附性不佳, 是否可用collagen先coating在slide表面?
2. wash
* 实验室传下的实验步骤是: wash 3次, 把chamber slide用PBS灌满, 再吸走
* 听说某实验强者: 3次, 每次wash 5分钟
--> 到底哪种可以洗得比较乾净?
3. 2抗有杂质要怎麽办?
我同学的二抗是anti-goat的FITC, 在显微镜下看起来有好多杂质(特亮的点, 也不是
细胞的型态), 不晓得是不是一定要买新的抗体才能解决? 另外, 是否可离心将杂质
离下来呢? (但是杂质好小耶, 比细胞还小, 离的下来吗).
话说我家实验室的二抗是anti-mouse的FITC最近听学姊和助理说, 好像坏掉了
(会乱bind <-- 这要怎麽看啊?), 而且好像有杂质. 据说这是好几年前(>3-4yr)买的,
但是我用都没有问题, 不晓得到底是为什麽啊?
所以我才会想说我同学的样品出现杂质, 是不是也可以避免的呢? 多wash几次有用吗?
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◆ From: 140.129.61.120
1F：推 microball:可以增加二抗的 blocking 10/27 04:52
2F：推 paua:请问是指稀释2Ab的blocking solution (ex FCS), 10/27 10:36
3F：→ paua:要增加FCS的量? 或是时间加长呢? 10/27 10:37
4F：推 turtle24: 1的话 学长是把plate拿去离心 加速贴附 也比较平均 10/27 14:09
5F：推 paua:谢谢:) 10/28 11:42
6F：推 beuige:怎麽离心阿???我的细胞都会在四周为聚集耶...怎麽办??? 10/30 18:05