※ 引述《[email protected] (waiting for good news)》之铭言： > 哈哈, 不好意思, 问题有点多 :P > 我自己之前做过(chamber slide), 样品处理都没什麽问题, 但是这次带着同学做, > 竟然出现一些奇怪的问题... 麻烦请大家和我一起想想, 谢谢喔 :) > 我知道这应该没有标准答案, 所以想请大家分享一下经验 ^^ > 1. 种细胞 > (1) 细胞不易种匀, 如果我在种细胞过後一个小时再pipetting, 可以让它更均匀吗 > (2) 当细胞贴附性不佳, 是否可用collagen先coating在slide表面? 你好 , 我也是新手 也许你可以参考看看 (1) 一般细胞会在1~3小时内贴附上去 , 如果你又去pipetting他 对於已经开始贴上去的细胞是种伤害 , 因此不建议 如果你希望均匀一点 , 可以沿着管壁多pipetting几次(细胞尽量分开比较好) 另外许多器皿的设计底部并不是全平的 , 再加上靠近旁边会有张力 因此液面高度是不一样的 , 建议medium可以多加一点克服分不不均的问题 (2) 我的做法: 先用盐酸浸泡玻片(此步功效影响不大) 再用Poly-lysine coated (但因为是自己coated 容易造成分布不均) 後来我索性不做这些步骤 , 直接小心的把打匀的细胞均匀的滴在玻片上 小心不要摇动他(过程中都要小心), 等5min左右在拿去显微镜下观察 > 2. wash > * 实验室传下的实验步骤是: wash 3次, 把chamber slide用PBS灌满, 再吸走 > * 听说某实验强者: 3次, 每次wash 5分钟 > --> 到底哪种可以洗得比较乾净? > 3. 2抗有杂质要怎麽办? > 我同学的二抗是anti-goat的FITC, 在显微镜下看起来有好多杂质(特亮的点, 也不是 > 细胞的型态), 不晓得是不是一定要买新的抗体才能解决? 另外, 是否可离心将杂质 > 离下来呢? (但是杂质好小耶, 比细胞还小, 离的下来吗). > 话说我家实验室的二抗是anti-mouse的FITC最近听学姊和助理说, 好像坏掉了 > (会乱bind <-- 这要怎麽看啊?), 而且好像有杂质. 据说这是好几年前(>3-4yr)买的, > 但是我用都没有问题, 不晓得到底是为什麽啊? > 所以我才会想说我同学的样品出现杂质, 是不是也可以避免的呢? 多wash几次有用吗? -- 夫兵者不祥之器物或恶之故有道者不处君子居则贵左用兵则贵右兵者不祥之器非君子 之器不得已而用之恬淡为上胜而不美而美之者是乐杀人夫乐杀人者则不可得志於天下 矣吉事尚左凶事尚右偏将军居左上将军居右言以丧礼处之杀人之众以哀悲泣之战胜以 丧礼处之道常无名朴虽小天下莫能臣侯王若能守之万物将自宾天地相合以降甘露民莫 之令而自均始制有名名亦既有夫亦将知止知止可以不殆譬道 n175139.nhri.org.tw海