※ 引述《piggylo (piggy)》之铭言： : 目前我做的PCR或RT-PCR都会面临到再现性不好的问题 : 例如有些sample第一次跑是会有产物的，可是之後再多跑几次又会不见了 : 为了排除是否因为DNA或cDNA品质不好， : 我有检查过DNA的ratio以及cDNA的GAPDH表现 : 结果都是OK的，可是往往在做PCR或RT-PCR时，就会出现反反覆覆不同的结果 : 让我很困扰，因为自己无法解决也没办法向老师报告实验结果 : 因此希望在这里可以请教各位看看是否是哪边有问题，谢谢。 我之前也有这样的问题， 但是到最後解决的方法却很扯： 问了几个实验室， 他们也跟我说可能template有问题～毕竟我是第一次抽mRNA然後cDNA synthesis.. 但是template OD ratio还OK～ -_-" 重新再做一次cDNA...同样没用～ 还考虑会不会是水的问题～ 也想到了有没有可能是enzyme活性变差～或是reagent污染～ 使用DMSO racipe也没有用～ 到最後学姐用让人不太舒服的方法：叫另一个常做PCR的学姐跟我同时做 （side by side） 且使用该学姐的recipe..（未含DMSO） 结果～居然产物又出现了.... 至今～还是不确定到底是哪里有了问题～（我认为应该是当初学姐给我的recipe 有问题） 不要只考虑template出问题～有可能其他部分也会影响～ 且现在将template放在4℃（如果常用） 因为反覆解冻可能也会影响.... --

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