各位好 我现在是用 人类细胞株中抽取的 genomic DNA 当作 template 进行 PCR 想要 P 出一段长度约 3 K 的 promoter region 之前可能因为 primer 没有设计好 一直 P 不出来 重新设计 primer 後 是可以在正确位置看得到 band 可是 不管怎麽改变 annealing 的温度 或 DNA template 的量.. 甚至是增加 cycle 数 (35 --> 40) 都没有办法让这 band 的 signal 强一点 量一直都非常少.... 我的 PCR condition 如下: 98 ℃, 3 min 98 ℃ 1 min 61.0 or 58.0 ℃ 40 sec 72 ℃ 3 min ×35 or 40 72 ℃ 10 min 4 ℃ ∞ DNA template 的量 则是从 3 ng --> 2 ug 都试过了 不是 P 不出 就是只有微弱的 band Primer 则 FW RV 各加 100ng 要提到的是 因为是 promoter region 两个 primer 都有 GC-rich 的情况 FW 还好 ( 55 %) 但 RV 的 GC 高达 66.67 % 不知道这是否影响了我 PCR 的产率? 还是 DNA template 不够乾净?? 或说这样的 PCR 还有什麽需要特别留意的地方?? 谢谢各位的指教~~谢谢!! -- 白天不懂夜的黑 太阳不解月的悲 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.60.46 ※ 编辑: ZecAhau 来自: 140.109.224.35 (11/12 23:36)