作者patrickp1005 (tommy)
看板Biotech
标题[问题] TritonX-100 soluble and insoluble 的不同?
时间Mon Nov 13 16:46:55 2006
最近看 paper 的时候发现
有的人会分别收
TritonX-100 soluble and TritonX-100 insoluble cell extracts
来进行 Western blot
我想知道的是...
这两种 fractions (TritonX-100 soluble and TritonX-100 insoluble)
所收集到的 proteins 性质上有什麽差异?
举例来说:
我看到的这篇 paper 中,将细胞处理 MG132(a proteasome inhibitor)
原本他假设某个compound会促进某个protein进行proteasomal-deprendent degradation
所以预期加入proteasome inhibitor会block此target protein 进行degradation
但是他要看的 target protein 在 TritonX-100 soluble fraction 中并没有增加
结果他又另外做了 TritonX-100 insoluble fraction 结果是增加的
於是作者提出结论认为此compound的确会促进
此 target protein进行proteasomal-deprendent degradation
所以我想知道TritonX-100 soluble 和 insoluble fraction 有何差异?
这是否代表 ubiquitinated proteins 是属於 TritonX-100 insoluble?
我发现不少 paper 都会进行这样的分离
但不是很清楚这样做的目的何在?
有没有人可以提供一些资讯呢?
补充说明:
For preparation of Triton X-100 soluble and insoluble fractions,
After removal of Triton X-100 soluble cell lysate supernatants
by centrifugation, the pellets were washed once with the lysis buffer
and 1x SDS loading buffer (50 μL) was then added to the pellets and
heated at 95°C for 15 minutes to dissolve the Triton X-100-insoluble proteins.
收cell lysates的lysis buffer含有低%的TritonX-100
本篇作者将离心过後的pellets再用SDS loading buffer回溶得到
Triton X-100 insoluble fractions
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.216.103.208
1F：→ apa9394:TritonX-100是non-ion detergent...加了会使protein 11/13 18:34
2F：→ apa9394:被拉直而改变了structure吧... 11/13 18:35
3F：→ apa9394:而且重点在於这类protein这种方法也只是初步区分的2分法.. 11/13 18:35
4F：→ apa9394:要将该类protein分类完整要通column吧... 11/13 18:37
5F：→ apa9394:just guess... 11/13 18:39
6F：推 havenn:应该是初步的分membrane protein 在 TritonX-100 fraction 11/13 18:43
7F：推 apa9394:原来是利用 detergent使membrane protein纠成一团... 11/13 18:56
8F：→ apa9394:可是听说现在不是很多KIT在分membrane protein效果还不错 11/13 18:58
9F：推 blence:有些人用低%T100来区分cytosolic与nucleus fraction 11/13 19:33
10F：推 blence:上面给的资讯太少,不过照常理应该是说poly-ubi让protein被 11/13 19:39
11F：→ blence:核内蛋白分解,而在MG132的作用下,核内的蛋白分解机制消失了 11/13 19:43
12F：推 patrickp1005:回blence,你说的没错... 11/13 20:05
13F：→ patrickp1005:但在X100 soluble fraction中,밠 11/13 20:06
14F：→ patrickp1005:target protein量没有增加,在 insoluble fraction中 11/13 20:07
15F：→ patrickp1005:却是增加的..所以我才很纳闷... 11/13 20:08
16F：→ patrickp1005:soluble和insoluble到底差在哪里 11/13 20:08
17F：推 patrickp1005:再请问一下 %T100 soluble 是在 nuclear or cytolsol 11/13 20:11
※ 编辑: patrickp1005 来自: 61.216.103.208 (11/13 20:25)
※ 编辑: patrickp1005 来自: 61.216.103.208 (11/13 20:32)
※ 编辑: patrickp1005 来自: 61.216.103.208 (11/13 20:33)