作者hychou (布丁)
看板Biotech
标题[问题] 如何计算RT的效率呢?
时间Mon Nov 20 11:53:41 2006
板上的前辈们好,
最近在进行RT-PCR,所用的RT为invitrogen的superscript III
RT前我先测了total RNA浓度後,以5ug RNA去RT (reaction vol.=20ul)
RT结束,我取1ul cDNA来测浓度, 100x稀释 OD260=0.299
其浓度计算是否为0.299x40x100=1.196ng/ul
这样算的话cDNA不就有1.196x20=23.92ng @@(昏)
请问前辈们,究竟哪里出了问题?
我用random primer来RT,应该不会有影响吧?!
另外,这批RNA的ratio大概都在1.6左右,
这样是否会影响之後的real time PCR反应?
我最烦恼的是standard curve是否会做不好?
谢谢大家帮忙!!
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