作者aggaci (学钢琴，左手怎麽那麽笨)
看板Biotech
标题Re: [问题] 如何计算RT的效率呢?
时间Mon Nov 20 12:17:35 2006
※ 引述《hychou (布丁)》之铭言：
: 板上的前辈们好,
: 最近在进行RT-PCR,所用的RT为invitrogen的superscript III
: RT前我先测了total RNA浓度後,以5ug RNA去RT (reaction vol.=20ul)
: RT结束,我取1ul cDNA来测浓度, 100x稀释 OD260=0.299
: 其浓度计算是否为0.299x40x100=1.196ng/ul
: 这样算的话cDNA不就有1.196x20=23.92ng @@(昏)
: 请问前辈们,究竟哪里出了问题?
: 我用random primer来RT,应该不会有影响吧?!
: 另外,这批RNA的ratio大概都在1.6左右,
: 这样是否会影响之後的real time PCR反应?
: 我最烦恼的是standard curve是否会做不好?
: 谢谢大家帮忙!!
RT後的cDNA应该无法测cDNA浓度！
您想一下ribonucleotide测浓度原理即知
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◆ From: 140.114.100.165
※ 编辑: aggaci 来自: 140.114.100.165 (11/20 12:20)
1F：推 hychou:请问是否因为spectrophotometer只能测pure DNA or RNA? 11/20 13:17
2F：推 aggaci:dNTP也会吸光 11/20 14:39
3F：推 hychou:谢谢前辈的指教(恍然大悟貌) 11/20 15:24
4F：推 Solow:O_O 原来是这样啊…… 11/20 18:49