※ 引述《aggaci (学钢琴，左手怎麽那麽笨)》之铭言： : ※ 引述《hychou (布丁)》之铭言： : : 板上的前辈们好, : : 最近在进行RT-PCR,所用的RT为invitrogen的superscript III : : RT前我先测了total RNA浓度後,以5ug RNA去RT (reaction vol.=20ul) : : RT结束,我取1ul cDNA来测浓度, 100x稀释 OD260=0.299 : : 其浓度计算是否为0.299x40x100=1.196ng/ul 40核醣核酸（RNA）的常数....不是单股的去氧核醣核酸 : : 这样算的话cDNA不就有1.196x20=23.92ng @@(昏) : : 请问前辈们,究竟哪里出了问题? : : 我用random primer来RT,应该不会有影响吧?! : : 另外,这批RNA的ratio大概都在1.6左右, : : 这样是否会影响之後的real time PCR反应? : : 我最烦恼的是standard curve是否会做不好? : : 谢谢大家帮忙!! : RT後的cDNA应该无法测cDNA浓度！ : 您想一下ribonucleotide测浓度原理即知 还是有读值没错啊...只是一股是RNA...一股是cDNA....哈妙.... 这系数会是多少？我真很好奇....不知有没人知道？ 基本上RT做的好不好.....是透过比较housekeeping gene啦 如果你几次实验跑下来Housekeeping gene的 Ct值都差不多...你就算RT高手了 其次，同一trial的standard curve怎做都很漂亮.....只要你的pipette不差 难在inter trial的standard curve........真的要练一阵子....不过这是 real -time PCR最难的部份....在你手法还不稳之前...别轻易下结论喔！切记 --

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