作者ROKEE (可不可以不要再胖下去啦~)
看板Biotech
标题Re: [问题] 关於Inclusion Body的纯化
时间Wed Dec 6 15:15:15 2006
※ 引述《brigand (台湾加油)》之铭言：
: 我的蛋白质已经不可能形成Native Form
: 所以纯化Inclusion Body是我唯一的选择
: 我的Protein 是 GST-fusion protein
: 是使用 Glutathione Sepharose 来结合然後冲提出来
: 想请问板上的大大们
: 如果我的Inclusion Body是溶在 PBS + 8M urea + 10mM PMSF 的环境下
: Glutathione Sepharose 的 binding 能作用吗?
: PMSF 跟 Urea 是否会影响 binding 呢?
基本上 GST 是和 Glutathione Sepharose (以下简称resin)
上的 10 个 C 原子结合，藉此和其它 crude 分开
如果你的蛋白这麽「顽劣」，甚至接在 GST 後面还不可溶的话
那麽上述的这套方法并不适合你使用
因为你的 system 含有 urea，换句话说，连 GST-tag 都被 denature
那 resin 要认什麽?
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