作者mandible (生化...go go go !!)
看板Biotech
标题Re: [问题] Real-time PCR
时间Thu Dec 7 22:40:53 2006
※ 引述《lakerjackt (NN )》之铭言：
: 有人用过从血液中抽出的cDNA做real-time PCR吗?
: 因为本身是用ABI的机器run real-time PCR...
: 但一直try不好PCR的condition...
: 不然就是有出来後...再做一次就没出来了...
: 且Ct值一值都满後面的...40上下...
: 所以一直做到没信心...><
: 所以我想请问各位real-time PCR几个问题..以解笨小弟我的疑惑..
: 1.real-time PCR做的时候,反应的量一定要加的很精准吗???
: 2.ABI的real-time PCR是不是都不用设定annealing..这样一定都做的出来喔??
: 3.因为我是用kit抽RNA,但是是用一般方法转cDNA..所以会有可能cDNA转的不好吗?
: 4.请问有人用invitrogen这家的kit抽RNA吗?...做後续效果都可做很漂亮吗??
: 5.请高手帮我想一下我该怎麽办...谢谢...
ans:
1.式的..不然干嘛做q-pcr
2.理论上原厂有设好的.你可以改变!!
3.用kit理论上会抽的比较好~但是凡事皆有例外.请用MOPS跑RNA看看
是否有Degrade现象产生!也可以用A260/280/230做为RNA quality control
4.没做过!!请高手回答!
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