作者aistella (海风。沙)
看板Biotech
标题Re: [问题] help 有关蛋白质纯化
时间Sun Dec 10 01:53:19 2006
※ 引述《[email protected] (六百)》之铭言：
: his-tag 的特性就是会 bind Ni (镍)
: NI-NTA 是带有 Ni 的树脂颗粒
: 把 cell lysate 跟 Ni charged resin incubate 一段时间
: （或者是过 column）
: his-tagged protein 会黏到上面
: wash 以後再用 low pH buffer 来 elute 就可以得到纯化的蛋白质
: Urea 是用来 denature 蛋白质的
: 低 pH 值则可以干扰 his-tag 跟 Ni 的 binding
请问urea是要用来denature protein的用意
是否是要让protein变成线状好跑SDS-PAGE来分析?!
还有阿..
如果说低pH的urea buffer 易让protein degrade 掉
不易纯化出来
我要怎麽用高pH解救我的protein?!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.118.151
1F：推 mindy27:防止degrade的方法 低温 或是你用低pH buffer elute下来 12/10 02:34
2F：→ mindy27:後再添加一些较高pH buffer将pH值提高为中性 12/10 02:35
3F：推 mindy27:至於urea与SDS-PAGE上的protein关系很多地方都可以找到 12/10 02:43
4F：→ mindy27:可以尝试自己找找看 收获会比较大喔.. 12/10 02:44