※ 引述《[email protected] (海风。沙)》之铭言： > ※ 引述《[email protected] (六百)》之铭言： > : his-tag 的特性就是会 bind Ni (镍) > : NI-NTA 是带有 Ni 的树脂颗粒 > : 把 cell lysate 跟 Ni charged resin incubate 一段时间 > : （或者是过 column） > : his-tagged protein 会黏到上面 > : wash 以後再用 low pH buffer 来 elute 就可以得到纯化的蛋白质 > : Urea 是用来 denature 蛋白质的 > : 低 pH 值则可以干扰 his-tag 跟 Ni 的 binding > 请问urea是要用来denature protein的用意 > 是否是要让protein变成线状好跑SDS-PAGE来分析?! 不是 跑 SDS-PAGE 的时候 sample buffer 就会让 protein denature 了 纯化时用 urea denature 是因为 你不是说你要的东西是在 inclusion body 里面? inclusion body 不溶啊 怎麽纯化？ 只好把他 denature 掉噜 另外如果你希望你的 protein 是有活性的 inclusion body 里面的 protein folding 反正都不对 要 denature renature 以後才有救 > 还有阿.. > 如果说低pH的urea buffer 易让protein degrade 掉 > 不易纯化出来 > 我要怎麽用高pH解救我的protein?! 应该可以改用 immidazo 但是我不知道 Ni-NTA 有没有什麽特别不能用 immidazo 的理由 -- 莫非定律: 到了期末才会想起期初曾选了一门课却一直没去上 补充定律: 拿到成绩单才发现上了一学期的课忘了去考期末考 -- ※ Origin: 生命科学 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw> ◆ From: ppp-70-227-5-184.dsl.bcvloh.ameritech.net