※ 引述《[email protected] (六百)》之铭言： : ※ 引述《[email protected] (海风。沙)》之铭言： : > 请问urea是要用来denature protein的用意 : > 是否是要让protein变成线状好跑SDS-PAGE来分析?! : 不是 : 跑 SDS-PAGE 的时候 sample buffer 就会让 protein denature 了 : 纯化时用 urea denature 是因为 : 你不是说你要的东西是在 inclusion body 里面? : inclusion body 不溶啊 怎麽纯化？ 只好把他 denature 掉噜 : 另外如果你希望你的 protein 是有活性的 : inclusion body 里面的 protein folding 反正都不对 : 要 denature renature 以後才有救 我如果要纯化inclusion body的protein的话 我是会用含8M urea的buffer先去破inclusion body 也顺便把蛋白质denature 溶在buffer中 然後去过column 再来可以on column refolding (逐渐降低urea的浓度) 或是refolding後再过column 这是我们实验室的作法 不一定是最好的方法 >< : > 还有阿.. : > 如果说低pH的urea buffer 易让protein degrade 掉 : > 不易纯化出来 : > 我要怎麽用高pH解救我的protein?! : 应该可以改用 immidazo : 但是我不知道 Ni-NTA 有没有什麽特别不能用 immidazo 的理由 应该是没有 因为我也是用imidazol 另外也可以用EDTA 我倒是没用过降pH值的方法 改变pH值可能还要考虑protein等电点的因素 以免沉淀太严重 --

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