作者dorphilvet ( )
看板Biotech
标题Re: [问题] help 有关蛋白质纯化
时间Sun Dec 10 17:19:20 2006
嗯，我们的实验室也是差不多的
但如果你用8M的URE去溶的话
我们是把8M Urea 加入binding buffer
然後去破菌
离心後收上层液，你可以在这个地方透析
再去纯化，跑sds page
或是纯化的过程中的buffer都要含8M Urea的去泡
纯化後的蛋白wash後用都可以用imidazole去把蛋白elute下来
但你都要透析哦
ps你直接加lysis buffer是想要跑page後，不染色而去切gel来纯化吗
※ 引述《snowtree (blue eyes blue)》之铭言：
: ※ 引述《Fourfish (～四条鱼～)》之铭言：
: : 不好意思 借这篇顺便问个问题@@
: : 用8M Urea去溶inclusion body之後
: : 可以直接加SDS PAGE的loading buffer跑SDS PAGE吗？
: : 我这样做反而gel上要的band不见了 而底部有一两条很浓的band...= ="
: : 如果不care protein的structure的话
: : 各位会建议直接用loading buffer溶pellet吗？
: 照你的文章来看 你有去破菌吗??
: 你只加了 lysis buffer 就要去跑胶了吗
: 步骤应该是 1. pellet回溶 2.破菌 3.纯化 4. SDS-PAGE 确认
: 你破完菌是可以先跑看看 但是你好像没破菌的样子 \
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