※ 引述《shuo218 (快乐的理由)》之铭言： : 最近在抽plasmid 因为我们实验室是第一次接触细菌的实验 : 虽然照protocol下去做 可是抽完的浓度都少的可以 : 下面是我的protocol 还麻烦大家可以帮我解决这个问题 : 1 colony of successfully pGL-transformed E.Coli to 10ml prewarmed LB+ (in tube) : Incubate o/n (16H) 37°C 60rpm : 一次培养2管，然後将两管倒在一起成20ml : Centrifuge the 20ml culture at 10,000g x 5min : 接下来的步骤都是照promega的protocol做的 : 不过最後我们是用40ul回溶 因为上次用100ul觉得量太少 : 结果今天做出来量更少 大概只有0.0125 ug/ul : 实在不知道是哪边出问题 : 因为後面要切 然後ligase 回收 再送到E.coli : 可是前面的量就很少 後面好像根本就没办法做下去 : 大家有什麽好的方法吗?谢谢!! 我不知道你的实际情形为何， 像我之前做过有点诡异的一次也是类似你的情形， （我使用的是QUIGEN出的mini-prep） 一开始我以为会不会是该vector为low copy number 但应该不可能，因为该vector就是卖来做cloning的... 所以我想说就将养久一点... 并且狠了心给他放大两次... 但结果同样不好。 後来， 跟隔壁实验室讨论的结果， 想说有没有可能因为我们拿这个vector并没有用该公司所提供的菌种， 而是用我们自己实验是的competent cell... 可能细胞不喜欢该vector...-_-" 因此该公司随着kit卖的competent cell重新transform... 这次没有放大、没有加大LB量， 自然产量就很OK.... 另外在操作的时候， 一些小动作也会影响（我认为啦） 像是学姐叫我说将细胞离心下来後， 先用残留在试管的溶液将细胞resuspend， 再加上solution I， 但是我自己操作的时候则是将solution I加入後再与pallet一起resuspend... 至少测出来的OD就比学姐做的好多...-_-" 总之～good luck... --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 12.210.188.92