※ 引述《shuo218 (快乐的理由)》之铭言： : 最近在抽plasmid 因为我们实验室是第一次接触细菌的实验 : 虽然照protocol下去做 可是抽完的浓度都少的可以 : 下面是我的protocol 还麻烦大家可以帮我解决这个问题 : 1 colony of successfully pGL-transformed E.Coli to 10ml prewarmed LB+ (in tube) : Incubate o/n (16H) 37°C 60rpm : 一次培养2管，然後将两管倒在一起成20ml : Centrifuge the 20ml culture at 10,000g x 5min : 接下来的步骤都是照promega的protocol做的 : 不过最後我们是用40ul回溶 因为上次用100ul觉得量太少 : 结果今天做出来量更少 大概只有0.0125 ug/ul : 实在不知道是哪边出问题 : 因为後面要切 然後ligase 回收 再送到E.coli : 可是前面的量就很少 後面好像根本就没办法做下去 : 大家有什麽好的方法吗?谢谢!! 1.因为你是用Kit抽plasmid,所使用的column都有可以容纳DNA量的上限, 过多的的菌并不会让所抽的DNA变多,反而会让你所加的Solution 1,2,3效果变差 最好是依照portocol上所建议的菌液体积来进行实验, 若所需要的DNA要很多,可以将摇的菌多分成几管来进行,不要全部混合到一管进行实验. 2.最後一步用水回溶的体积可以用100ul,并且注意最後加的时候,是加到column的中间, 最後再用真空乾燥浓缩DNA,这样可以增加所抽取出来DNA的量 --

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