作者mandible (生化...go go go !!)
看板Biotech
标题Re: [问题] Real-time PCR
时间Fri Dec 15 21:29:08 2006
※ 引述《lakerjackt (NN )》之铭言：
: 我想请问各位做real-time PCR的高手...
: 若cDNA转不好(就是一般PCR做的出来,但real-time却做不出来)
: 那可能就是不够纯...请问除了重转外..有没有其他可以补救的方法吗?
: 拜托各位!!
你觉得pcr做的出来!q-pcr会做不出来吗??
那你可能有点误导q-pcr的原理唷!
: ※ 引述《bloodgas (奶油ˊ的梦)》之铭言：
: : 1.是的,要尽可能精准
: : 2.我们实验室用的是Roche的机器,不过所有program的温度跟时间都可以调整,因为每一个
: : 基因都不一样,同样的条件不可能适用於所有PCR,所以一定要optimization,ABI机器
: : 没用过,所谓的不能改条件意思是????
: : 3.RNA用column抽或是TRIZOL抽都一样,quality没问题,reverse transcription只要没有
: : RNase污染就没问题
: : 4.要check RNA quality就直接跑个gel来看,28S/18S的band正确,比例也正确就可以
: : 5.crossing point 40是太低了,应该就是没有东西吧...你测过抽出来的RNA的浓度吗?
: : 你是用多少total RNA下去做reverse transcription? 一般都用0.5-1 ug, 另外,
: : 你做过house keeping gene的real-time PCR吗?这样可以直接确定你的cDNA有没有问题.
: : 还有一点就是可以加上一个positive control,plasmid或是PCR fragment,这样才能
: : 确定至少real time PCR的过程没有问题..
: : 以上
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