作者shuo218 (快乐的理由)
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标题Re: [求救] 抽pasmid的量都好少
时间Fri Dec 15 22:32:51 2006
※ 引述《bloodgas (奶油ˊ的梦)》之铭言：
: ※ 引述《shuo218 (快乐的理由)》之铭言：
: : 最近在抽plasmid 因为我们实验室是第一次接触细菌的实验
: : 虽然照protocol下去做 可是抽完的浓度都少的可以
: : 下面是我的protocol 还麻烦大家可以帮我解决这个问题
: : 1 colony of successfully pGL-transformed E.Coli to 10ml prewarmed LB+ (in tube)
: : Incubate o/n (16H) 37°C 60rpm
: : 一次培养2管，然後将两管倒在一起成20ml
: : Centrifuge the 20ml culture at 10,000g x 5min
: : 接下来的步骤都是照promega的protocol做的
: : 不过最後我们是用40ul回溶 因为上次用100ul觉得量太少
: : 结果今天做出来量更少 大概只有0.0125 ug/ul
: : 实在不知道是哪边出问题
: : 因为後面要切 然後ligase 回收 再送到E.coli
: : 可是前面的量就很少 後面好像根本就没办法做下去
: : 大家有什麽好的方法吗?谢谢!!
: 想先请问一下实验的细节..你是用什麽管子养菌的,第二个问题是,
: 请问你是用哪一种column抽DNA
1.我是用高速离心管直接下去养的耶，这样可行吗?
2.我用的column是跟promega买的
他的kit是这个名字WizardR Plus SV Minipreps DNA Purification System
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◆ From: 220.140.37.184
1F：推 aggaci:promega抽plasmid这组我们lab觉得超难用，原因也是量太少 12/15 22:54
2F：→ aggaci:後来用invitrogen的，真是赞 12/15 22:55
3F：推 bluejelly:I have similar problem with Promega kit too!! 12/16 00:46
4F：→ bluejelly:I just couldn't have enough yield for cloning 12/16 00:48
5F：→ bluejelly:I shortened the incubation time to 14hr but in vain 12/16 00:50
6F：→ bluejelly:I also tried high copy number pUC19. Same result 12/16 00:51
7F：推 Liebesleid:不要用高速离心管养吧... :P 用tube喔 12/16 15:18
8F：推 bluejelly:对啊 我用tube喔~ 12/17 00:24