作者redhawk ( )
看板Biotech
标题Re: [问题] Real-time PCR
时间Sat Dec 16 14:12:43 2006
※ 引述《lakerjackt (NN )》之铭言：
: 哈....这是事实.....
: 我的cDNA目前真的PCR做的出来....用的primer还是用跨intron的...
: 但real-time就是做不出来....
: 所以我才头大阿!!!
: (ABI厂商是说我cDNA没转好..但我cDNA就是有转成功阿...
: 就一直说我的cDNA不够纯...所以请各位救救我
: ※ 引述《mandible (生化...go go go !!)》之铭言：
: : 你觉得pcr做的出来!q-pcr会做不出来吗??
: : 那你可能有点误导q-pcr的原理唷!
基本上,的确是PCR做的出来的,q-PCR也应该要看到结果
cDNA的纯度真的很重要, 不只是在转cDNA的过程
先前准备RNA的步骤也有很大的影响
尤其是处理酒精的步骤, 不够乾净俐落的话, 是会影响深远的^^"
另外, 不知道你转cDNA是用OligodT或是random hexmer呢?
这个对你要看的是什麽基因也会有影响
不过目前我觉得酒精去除的不够乾净应该是主要原因之一
你可能需要重新Isolate一次会比较好
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