作者lakerjackt (NN )
看板Biotech
标题Re: [问题] Real-time PCR
时间Sat Dec 16 14:33:07 2006
这我知道阿...但酒精真的有影响到我的cDNA...
应该连PCR都做不太出来阿!!!
其实我是在猜机器或试剂有问题....
反正我现在头大了阿!!...
red大是建议我把cDNA再通一次column..把酒精洗净吗?
※ 引述《redhawk ( )》之铭言：
: ※ 引述《lakerjackt (NN )》之铭言：
: : 哈....这是事实.....
: : 我的cDNA目前真的PCR做的出来....用的primer还是用跨intron的...
: : 但real-time就是做不出来....
: : 所以我才头大阿!!!
: : (ABI厂商是说我cDNA没转好..但我cDNA就是有转成功阿...
: : 就一直说我的cDNA不够纯...所以请各位救救我
: 基本上,的确是PCR做的出来的,q-PCR也应该要看到结果
: cDNA的纯度真的很重要, 不只是在转cDNA的过程
: 先前准备RNA的步骤也有很大的影响
: 尤其是处理酒精的步骤, 不够乾净俐落的话, 是会影响深远的^^"
: 另外, 不知道你转cDNA是用OligodT或是random hexmer呢?
: 这个对你要看的是什麽基因也会有影响
: 不过目前我觉得酒精去除的不够乾净应该是主要原因之一
: 你可能需要重新Isolate一次会比较好
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 218.169.117.86
※ 编辑: lakerjackt 来自: 218.169.117.86 (12/16 14:33)
※ 编辑: lakerjackt 来自: 218.169.117.86 (12/16 14:35)
※ 编辑: lakerjackt 来自: 218.169.117.86 (12/16 14:36)
1F：推 redhawk:不不不, 酒精会影响PCR没错, 但是QPCR太灵敏, 层级不同 12/16 14:44
2F：→ redhawk:最好是重新抽一次RNA, 会这麽说是因为我们有人碰过类似问쌠 12/16 14:45
3F：→ redhawk:我想ABI的郑小姐应该会同意我的说法 12/16 14:46
4F：推 a64toto:不是徐玉君妈 12/16 15:03
5F：推 dlink:ABI的specialist很多呀 12/20 01:54