作者bluejelly (梦里不知身是客)
看板Biotech
标题Re: [求救] 抽pasmid的量都好少
时间Mon Dec 18 12:19:58 2006
我最近也在用Promega Wizard Plus SV Minipreps DNA Purification System
也是问题连连
我惯常养2ml culture (in falcon 14ml tube), 16hr, 150-200 rpm
transfer 1.5ml到小离心管 离下来後照protocol做
以往这样用QIAGEN的kit
或是自己配的buffer + 传统SDS-alkaline lysis miniprep protocol
都可以得到很好的产量 大约5-10ug
(我用的质体都是high-copy number的 在DH5alpha中)
换到这个实验室後用Promega
同样的步骤 只能得到大概1-1.5ug的plasmid 根本没办法做cloning
菌长得很好 没问题
又怕是overgrowth 我也试过将培养时间缩为14小时 产量还是很低
像是最後一步离心离久一点确保酒精都离掉了
或是加水时要放个两分钟再离
这些我都试过 没用
後来labmate建议养5ml culture
同时正好旧的一组kit用完 开新的
结果怎麽做都有genomic DNA污染 跑胶全是genomic DNA
除了resuspension那步用vortex
之後每步骤我都是mix by inversion 4~5 times
不知道genomic DNA哪来的
到底是我错 还是这批kit有问题 ><
总之这组kit真的很难用
不推荐
再试不出来我就要自己配buffer用回传统方法了
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 24.162.236.21
※ 编辑: bluejelly 来自: 24.162.236.21 (12/18 12:20)
1F：推 HerrHans:离完酒精後 或许可以放入烘箱 或自然风乾3分钟左右 12/18 12:26
2F：→ HerrHans:有些kit不能光靠离心把酒精 dry乾 还要烘一下或风乾一下 12/18 12:27
3F：→ HerrHans:不过原厂protocol没写这步骤的话 我是觉得或许不需要 12/18 12:28
4F：→ HerrHans:那就真的有可能是kit的问题 跟厂商追究吧... 12/18 12:28
5F：→ HerrHans:可以跟别的lab 借别套kit一起做 这样才有对照组^^ 12/18 12:29
6F：推 bluejelly:protocol上说column若过度乾燥可能也会低产量 12/18 12:30
7F：→ bluejelly:所以我不敢烘或水浴加热 12/18 12:30
8F：→ bluejelly:我後来也有离完心放个两分钟再加水 加完水再放两分钟 12/18 12:31
9F：→ bluejelly:也没用Orz 我会试试去借别的kit的 谢谢建议 12/18 12:31
10F：推 HerrHans:还有 我最後elute用的水或buffer都会以60~65度C 预热 12/18 12:40
11F：→ HerrHans:也可以帮助DNA的回溶.... 12/18 12:42