作者puec ()
看板Biotech
标题Re: [求救] 抽pasmid的量都好少
时间Mon Dec 18 17:37:11 2006
请问你是transform什麽样子的plasmid进去E.coli。有时候E.coli遇到不喜欢的
plasmid产量就会很少，就算是你增加体积，抽出来足够的plasmid以後，用enzyme
切过就会出现smear!!我猜你的plasmid可能很大，所以一看到smear你就以为是genomic
DNA 污染。smear产生的原因是因为kit抽出来的dna不够纯，带了一些dnase。为什麽？
因为E.coli不喜欢嘛。
建议你可以去别人家借借看其他牌子的kit抽抽看，我猜结果应该是一样。在我手上
的plasmid都是超不稳定的，就算是用qiagen抽，一切，还是会有smear。但是我发
现MN (前clontech)的nucleobond抽出来的plasmid相当乾净，并不会有上述问题。
如果你的plasmid真的很大的话，记得用高温(60度左右)的热水去elute，可以提高
产量。
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 220.130.218.41
1F：推 bluejelly:我用过pUC19 pGEX pET pEGFP pGKBT7 pGAD 全都一样结果 12/18 21:40
2F：→ bluejelly:最近有genoomic DNA是pET pGEX pEGFP 应该不是质体的错 12/18 21:41
3F：→ bluejelly:而且是>10kb有跑不下来的band 不是smear 12/18 21:42
4F：推 puec:这就真的是奇了～换kit吧～ 12/20 12:42