作者aggaci (学钢琴，左手怎麽那麽笨)
看板Biotech
标题Re: [求救] 抽pasmid的量都好少
时间Mon Dec 18 18:28:58 2006
※ 引述《puec ()》之铭言：
: 请问你是transform什麽样子的plasmid进去E.coli。有时候E.coli遇到不喜欢的
: plasmid产量就会很少，就算是你增加体积，抽出来足够的plasmid以後，用enzyme
: 切过就会出现smear!!我猜你的plasmid可能很大，所以一看到smear你就以为是genomic
: DNA 污染。smear产生的原因是因为kit抽出来的dna不够纯，带了一些dnase。为什麽？
: 因为E.coli不喜欢嘛。
: 建议你可以去别人家借借看其他牌子的kit抽抽看，我猜结果应该是一样。在我手上
我不这麽觉得...
我们lab用这组maxi kit通通都说很难用
换invitrogen的kit，结果量都超高....maxi可以抽到2mg(1ug/1ul)的plasmid
换clonetech的Maxi，结果也一样
不过这组quality差一点，260/280 Ration 1.7左右
我个人真的觉的是这组kit的问题
前面不也有人说过有雷同的情形吗
或是有谁用这组kit抽成功过的
所以换组kit吧 或是跟promega反应
: 的plasmid都是超不稳定的，就算是用qiagen抽，一切，还是会有smear。但是我发
: 现MN (前clontech)的nucleobond抽出来的plasmid相当乾净，并不会有上述问题。
: 如果你的plasmid真的很大的话，记得用高温(60度左右)的热水去elute，可以提高
: 产量。
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◆ From: 140.114.100.165
1F：推 HerrHans:大家都有用 都说不好用..如果都是最近买的话.... 12/19 12:52
2F：→ HerrHans:搞不好是Promega最近这批货有问题喔... 12/19 12:54
3F：→ aggaci:我们 2年前买的、做的 12/19 22:39
4F：推 kitiara:我用Promega抽了上百次Plasmid 觉得又快又好用耶 12/25 21:53
5F：→ kitiara:Ratio都是1.8以上 不过我们实验室是一次买很多箱 12/25 21:54
6F：→ kitiara:不知道是不是最近的有问题 12/25 21:55
7F：→ kitiara:忘了说我是抽Maxi 12/25 21:55