※ 引述《mandible (生化...go go go !!)》之铭言： : ※ 引述《rpr (Cathy)》之铭言： : : 其实,抑制物这个问题也不是无法可解 : : 主要就是减少template 的量 : : 但是咧,这又牵涉到你的template浓度的问题了 : : 虽说real-time PCR最少可以侦测到的RNA在pg等级(应该没记错) : : 但是你的template浓度到底要下多少,这恐怕要稍微考虑一下 : : 下的多,template跟抑制物的量都会高 : : 下的少,两个量也都会少 : : (其实跟我的实验的烦恼好像喔...) : : 加上试剂又贵,也不敢多试很多种... : : 只能说 : : Good Luck to you : 想请问你r大 : 你在做q-pcr时 : 利用RNA做PCR作为NEGATIVE CONTROL时 ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^ : 是否有侦测到萤光?若有Ct大约为多少? : 不好意思呢! 我不太了解你的意思 你是指NTC(no template control)呢? 还是指NPC(no probe control, 指没有放入TaqMan probe, SYBR green系统不适用)? 但是依照理论 不管是NTC or NPC,在TaqMan系统或者SYBR green系统下都不应该被侦测到 (这样才是negative control啊!) 如果在NTC or NPC有侦测到萤光就要考虑很多事情了 包括TaqMan probe解离,PCR污染, non-specific band, primer dimer等 (前两者适用TaqMan系统,後三者适用SYBR green系统) 其实这些都可以在实验的amplification curve 跟dissociative curve得到资讯 我只有做NTC,40个cycle的反应就是undetermined 早期有在TaqMan系统出现过38-39, 後来是看amplification curve决定是否有污染 但是觉得这样太投机,所以後来就更小心 SYBR green系统下也只相信Ct of NTC=40的data 不知道这样的回答能否解答你的疑惑? --

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