我们实验室 主要使用semi-dry transfer system 配法主要是 5.82克的 tris 2.93克的 glycine 3.75ml的 10% SDS 200 ml的 methanol 加水至1L 厂商建议的电压是30V 10分钟 或15V 15分钟 或 10V 30分钟 想请教几个问题，不知是否有人有经验 1.methanol的量高於20%，会不会使得大分子的蛋白质转不过去 2.SDS-PAGE 的%越高，是不是越难transfer 3.跑100kd以上的蛋白，transfer的电量是否要较高? (ex: >15V ) 我知道如果methanol低於20%的话，不易使小分子的蛋白transfer 但是我们实验室因为methanol是一大桶的，用到最後挥发很严重 无法准确的确认methanol的浓度 所以我配制的时候，都稍微高於200ml 我发现小分子都被转过去了，但是大分子都还留在胶上 我以前常跑7.5%的胶，transfer大约15V 15分钟 都可以完全transfer过去 最近常发现我使用高於12%或10%的胶，常常会发现transfer不完全的现象 我不知道是什麽缘故，如果是methanol挥发掉的话，电压应该会跑不上去 但是现在电压正常运作，却无法完全transfer到我的memberance上面 这些情况都是偶发性的， 所以我怀疑是methanol的问题，还是SDS的问题? 因为glycine 跟tris 都是powder，应不会有存放上的问题 谢谢拨空看完我这麽长的叙述! 是否有人遇到与我相同的经验? 现在开始考虑回去用湿式transfer了... 最近居然还有全乾式的transfer推出了 -- 如果活在世上只是扮演着大家所期望的自己 那扮演好了又怎样 不如静静的让自己消失吧 总是多余的存在只是种荒谬的错误 --

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