※ 引述《threestars (等待)》之铭言： : 我们实验室 : 主要使用semi-dry transfer system : 配法主要是 5.82克的 tris : 2.93克的 glycine : 3.75ml的 10% SDS : 200 ml的 methanol : 加水至1L : 厂商建议的电压是30V 10分钟 或15V 15分钟 或 10V 30分钟 我们都是看电流 算法是membrane面积*9/7ma 只看电压的话 若没电流就是断路了 (我通常用8*7cm左右的大小) 大概1~2HR : 想请教几个问题，不知是否有人有经验 : 1.methanol的量高於20%，会不会使得大分子的蛋白质转不过去 这我不知耶 : 2.SDS-PAGE 的%越高，是不是越难transfer 对 : 3.跑100kd以上的蛋白，transfer的电量是否要较高? (ex: >15V ) : 我知道如果methanol低於20%的话，不易使小分子的蛋白transfer : 但是我们实验室因为methanol是一大桶的，用到最後挥发很严重 : 无法准确的确认methanol的浓度 : 所以我配制的时候，都稍微高於200ml : 我发现小分子都被转过去了，但是大分子都还留在胶上 : 我以前常跑7.5%的胶，transfer大约15V 15分钟 都可以完全transfer过去 我做15%or 12%的, 最大的marker也通常transfer 不过 我觉得还好 因为会用这麽高的浓度 通常也都是看较小的分子 : 最近常发现我使用高於12%或10%的胶，常常会发现transfer不完全的现象 : 我不知道是什麽缘故，如果是methanol挥发掉的话，电压应该会跑不上去 : 但是现在电压正常运作，却无法完全transfer到我的memberance上面 : 这些情况都是偶发性的， : 所以我怀疑是methanol的问题，还是SDS的问题? 我觉得是transfer的时间或强度不够 才会小的分子可以大的不行 要特别注意电流和电压 : 是否有人遇到与我相同的经验? : 现在开始考虑回去用湿式transfer了... : 最近居然还有全乾式的transfer推出了 --

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