作者: mandible (生化...go go go !!) 看板: Biotech
标题: [问题] 请问PCR Full-length cDNA?
时间: Thu Dec 28 18:24:43 2006
PCR很多次了
还是P不出来
感觉primer dimer很明显?
请问高手有哪些方法?可以教导我!!
我的条件是
94度C-1mins
45度C-2mins
72度C-3mins
跑36 cycles
pcr product大概是784bp(我知道很短)但是就是跑不出来!
用的是taq proofreading enzyme (因为要送去定序)
大概是这样!x
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.64.49.5
※ 编辑: mandible 来自: 203.64.49.5 (12/28 18:25)
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※ 编辑: mandible 来自: 203.64.49.5 (12/28 18:26)
1F：推 ssuny:试试看提高annealing温度....extension时间不用这麽长吧? 12/28 18:31
2F：推 bahnhof:cDNA品质好吗？ 5'端确定都有转录到吗？ 12/28 18:33
3F：推 mandible:cDNA确定都有P到~有用其他基因验证!谢谢 12/28 21:04