作者skylawer (skylawer)
看板Biotech
标题Re: [问题] 请问PCR Full-length cDNA ?
时间Thu Dec 28 21:21:51 2006
※ 引述《mandible》之铭言：
: PCR很多次了
: 还是P不出来
: 感觉primer dimer很明显?
: 请问高手有哪些方法?可以教导我!!
: 我的条件是
: 94度C-1mins
: 45度C-2mins
: 72度C-3mins
: 跑36 cycles
: pcr product大概是784bp(我知道很短)但是就是跑不出来!
: 用的是taq proofreading enzyme (因为要送去定序)
: 大概是这样!x
假设 PCR 基本常识中 (Tm, DMSO, hot start....等等) 该试的都试过了
如果你是从 cDNA or genomic DNA amplify
要减少 primer dimer 的小方法你可试试
将你的mixture 分两管
每管先加其中一个primer 进行amplify
大约进形5~10 个 cycle 在将两管 mix 起来继续 amplify...
原理很简单 我想你推敲一下就了解了
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.64.75
1F：→ mandible:这个方法我会试试看!!谢谢您~~ 12/28 22:06
2F：推 oplz:primer dimer 也有可能是同一种 primer 形成 dimer .. 12/29 00:09
3F：推 skylawer:所以也只能试试罗..不过此法在 site direct 突变颇有效.. 12/29 01:11