※ 引述《ssuny (Cheer up!!!)》之铭言： : 感谢您的回文.. : 关於您说的我之前也有查过相关资讯 : 我也想说有可能只有一边被切开 不过还是硬着头皮做下去 : 酵素我是分两次切的 所以就算是没接成功应该也只是挑到吃到pET的colony : 可是今天挑出来的colony完全不是这回事 : 我挑到的colony切下来根本就不是pET...Orz : 这情形我从来没遇过 : 您的建议我会仔细考虑的...也许换个切位是最好的方式 : 多谢啦! 看你最後抽出来的应该是杂菌没有错 我想真的如之前版友说的你两个切位太近了 而且vector跟insert比例真的是过高 除了要看你两个enzyme的效率是不是不同 (有时也有可能是ENZYME失效) 有时候切动一刀也是接不进去的 还有你vector有做CIP吗? insert千万不要CIP喔 不然也是绝对接不进去的 除了这些还有你抗生素是不是有选对 还有抗生素的浓度 ligase的效率 甚至是你的胜任细胞是不是没有功用了 很多因素都要考虑 其实我觉得construction的确是要很多经验的累积 不过千万别因为这样就换题目啊...这是小事而已啊 -- my world!my life where is my guitar man? http://www.wretch.cc/user/isdorthy --

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