作者NARCOS (NARCOS)
看板Biotech
标题Re: [问题] 请问PCR Full-length cDNA ?
时间Mon Jan 1 18:52:09 2007
不知道我讲的对不对~~
我刚看书看到
针对於full-length cDNA
Primer should frame a sequence as far 3' as possible so that cDNA produced
by oligo(dT) priming needn't not be full length to act as a template in the
PCR
在把3'的primer 设计更尾端吧~~
※ 引述《mandible (生化...go go go !!)》之铭言:
: ※ 引述《puec ()》之铭言:
: : 如果你的template是 cDNA,那你可能是碰到了一些secondary structure,
: : secondary structure可能在你的primer 黏上去以前就形成了,因此占据了
: : 你的primer原本应该结合的位置。
: : 解决方法很简单,primer做长一点,往3'延伸就可以了。我的经验是... 36个mer
: : 的primer做不出来,加到40个mer就ok了。
: 我的data是在100bp以下一定会有的primer dimer
: 但是奇怪的就是在100bp上面左右会有primer的tetramer
: 是不是就是真的如你所说!我会在逝世看
: 我昨天用了55c还是一样有这种状况
: 跑了这麽久的pcr还是第一次有这种情形.快疯了
: 要投稿的最後两个data~~唉.卡在这做不下去
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