看你前面描述的内容 你的这个 construct 表现出来的蛋白质是没有任何 tag 的 我个人的看法是 作抗体的用的蛋白质 既然不在乎folding 实在没有理由不带 tag 会建议你重新 construct 一个带 his tag 的 有几个好处： affinity purification 出来的东西纯度通常比单纯的 wash 高 （也可以结合两者 更好） his tag 可以在 denature 的状况下与 Ni binding 可以用 western blot (1st Ab: anti-his) 确认最後产物的纯度 如果这样做了 最後纯化出来还是有超过一种分子量的产物 但是只要在 western blot 上都可以 specifically 被 anti-his Ab 认到 那我会相信这些可能只是 degraded form, 还是可以拿来生产抗体的 --- 另外 事实上打老鼠不一定要那麽纯啦 反正打老鼠时间不长 成本也不高（跟作monoclonal相比） 只要纯化出来的东西 想要的那种蛋白质占有明显的大比例 其实就可以用了 打两次以後取血样 用来染 control/overexpressed cell/tissue 效果好的话就是一支堪用的 polyclonal 了 甚至就算不太满意 还可以再用 pre-clean 之类的方法纯化抗体 -- 莫非定律: 到了期末才会想起期初曾选了一门课却一直没去上 补充定律: 拿到成绩单才发现上了一学期的课忘了去考期末考 -- ※ Origin: 生命科学 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw> ◆ From: adsl-65-43-230-142.dsl.bcvloh.ameritech.net