作者Fourfish (~四条鱼~)
看板Biotech
标题Re: [问题] 想请教关於Inclusion body纯化的问题
时间Thu Jan 4 21:22:43 2007
先谢谢两位的指点了><"
: 推 chiehgriffin:可以用TOF看看是那一个蛋白质 01/04 10:58
: → chiehgriffin:做疫苗?那您应该是NHRI的人噜? 01/04 11:00
: 推 chiehgriffin:可以试试低温表现,可能对soluble form有帮助 01/04 11:03
我不是NHRI的耶...
我现在只是个正在学习的大学生而已
所以还有很多东西不懂 需要前辈们的指点^^"
TOF??是荷质分析的仪器吗@@?? 如果是的话....可能就没办法了...因为学校这里没有..
至於低温表现 我有考虑过
可是想了一下 因为我的protein并没有tag可以用column纯化...
所以变成soluble form...纯化可能会变的更麻烦....
: 推 HXZ:比较non-induciton和induction的SDSPAGE可以知道那两条band 01/04 12:25
: → HXZ:是不是其实都是你induce出来的...是的话就放心去打ab吧 01/04 12:26
: 推 HXZ:刚刚仔细看一下你的描述 我想很有可能是sample denature不完全 01/04 12:30
HXZ大大推文的第一句提醒了我...
我回头仔细去看之前留下来的data
才发现...含重组vector的 non-induction的有小的那条 induction的大、小两条都有
还有...空vector的无论non-induction或induction却两条都没有
^^^^^^^^(即vector不含insert DNA,直接transformation)
那...那这样是什麽回事...><"
两条都是我的protein??
而会有两条band是因为induce後大量表现 folding错误...
再加上跑SDS PAGE前的denature不完全 而跑出这样的结果@@??
这样推论有可能吗?
如果是的话我该怎麽denature完全而做确认?加热久一点有用吗?
谢谢
另外也谢谢boblu大大的建议
只是用这个vector做颇久了...做到现在要马上放弃有点困难><"
而且觉得只差一点点了...就算要放弃也还是想了解一下另一条到底是什麽@@"
不过...其实利用fusion protein的方法已经有在考虑了...= ="
毕竟再耗下去也只是浪费时间罢啦
我会在衡量的 谢谢!!
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◆ From: 140.127.215.12
※ 编辑: Fourfish 来自: 140.127.215.12 (01/04 21:32)
1F:→ kirry:UREA 回溶後透析後再跑SDS会比较好 01/09 09:33