※ 引述《aggaci (学钢琴，左手怎麽那麽笨)》之铭言： : ※ 引述《gloclovlo (只想听音乐)》之铭言： : : 想请问各位 我现在做的QPCR 用的是ABI7000 SYBR GREEN : : primer设计是用ABI 的 primer express : : 可是我设定的amplicon 100 150 200 250 都找不到合适的 : 不太可能 : : 只有设定50 才找到amplicon长度为71bp的primer : 改一下参数 : 如primer的Tm值，别设那麽严格 : : 但amplicon太小 会不会对实验造成影响? 还是说也可以做QPCR : : 可以请各位提供意见吗 谢谢 : 是不会啦 但是一但要跑胶时，太短不好看 我最近也是在做Q-PCR, 我们用的机型式ABI 7900 基本上, 不太可能找不到适合primer 就像前面那一位板大说的, 也许你的的条件太过严苛了 我设计primer的条件提供给你作一下参考: template长度输入400bp以上 (越长, 可以搜寻的位置就会变多) primer Tm = 60度C 加减2度C primer长度 = 22mer 加减4mer PCR product长度 = 最长250bp 其他参数用设定值 基本上, 软体设计出来的不一定是最好的 我们只是从软体认为不错的primer挑出来.... 有时, 自己还是要修改一下.... 最後, 71bp是不会有影响啦.... 唯一担心的, 如果你的primer会形成primer dimer 那就会混淆你的结果........(因为primer dimer的位置都是在100bp以下) 所以, 我们比较不建议PCR product长度低於100bp 愿你顺利 BEST --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.54.2