作者shuyanc (燕燕)
看板Biotech
标题[求救] calcium phosphate transfection
时间Fri Jan 5 23:25:38 2007
我们实验室以前没有做过stable line transfection
由於没有 electroporator，想说先试试看 calcium phosphate的方式
我的细胞是 suspension 的，但仍有部份会贴在 plate 上
我是用 10cm dish 做，10 c.c. medium，15% serum RPMI
加入 DNA 之前细胞状况 OK
加入後看到很多黑色小点点
两个小时以後细胞就全死光了 (找不到一颗活细胞)
我的做法大致如下
20ug linear DNA in 450ul 0.1X TE
+2X HBS 500ul
+2.5M CaCl2 50ul
通入bubble 15min
室温静置 40min
一滴一滴加入 dish 中
请问各位有经验的前辈们
(1)黑色点点是不是致死的原因呢？
(2)若排除药品浓度错误 (我有找其他同学帮我 check 过，应该没配错)
还会有什麽可能性呢？
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◆ From: 124.8.77.27
1F：推 kitiara:颗粒多大?? 太大会让细胞碎掉 不过有些坚强细胞会没事 01/08 00:52
2F：→ kitiara:阿 你用悬浮细胞喔 这方式只能用在Attachment cell喔 01/08 00:54
3F：→ kitiara:回文好了 01/08 00:55