※ 引述《irein (123)》之铭言： : 各位大家好 : 麻烦植物高手救救我 : 在本学期的书报讨论挑了不适当的paper : 也无法更换 只能硬着头皮报告 : 是有关於nucleus-chloroplast and RNA metabolism : 我找的paper是在讲 : 阿拉伯芥细胞核基因HCF107所转译出的蛋白会去调控plastid gene表现 : 这篇paper是2005年的 : 作者利用positional cloning的技术选殖HCF107 gene : 我无法理解这个技术(从植物杂交到做map,然後挑出这个基因) : 看书都只知道原理 老师也认为我讲的不够清楚 : 我当时的叙述是 : 利用microsatellite marker找到这个gene位於chromosome 3 : 并得知与WT和mutant所link的marker : 使WT和mutant杂交产生F1 : F1自交产生F2 : 分析F2的genomtype : 并算出两marker间的recombinant frequency得到在chrmosome3上的相对位置 : 接下来做positional cloning : 以上我似懂非懂 有人可以更详细的解释吗 *[1;33m你说的这一段这就是positional cloning的基本原理 通常用WT/WT(ecotype 1) x mutant/mutant (ecotype 2) 产生F1 WT/mutant F1自交产生F2 在F2中 根据孟德尔定律 此子代会产生 1 WT/WT : 2 WT/mutant : 1 mutant/mutant 大多数的情形是选用mutant/mutant进行positional cloning 因为来自不同ecotype的marker会在此过程中 相对於突变基因的位置产生不同的recombination frequency 因此可以利用相近的marker来定位所寻找的突变基因之正确位置*[m : 也不懂为何阿拉伯芥已解序 为何还要用positional cloning *[1;33m虽然已解完 可是当你有一株新突变种时 还是不知道到底是哪一个基因突变 解完之序列可以作为寻找适当maker之依据 利用PCR即可大致定位突变基因*[m : 还有做complementation test : 看data是有回复mutant的功能 : 但是不懂做这个test是要怎样研究这个基因的function *[1;33m你说的complementation test是不是在找到这个基因後 把这个gene fragment转殖入原本的突变株中 这个目的是要验证此突变株之性状确实是由於後来所找到的基因突变所造成 简言之 突变株+找到的基因=WT 因此可以确认基因的功能*[m : 在我看来怎样都是多此一举= =" : 为了这个技术 怎麽讲植物老师都不满意 : 真是沮丧极了!! : 我不是做植物的 却要讲植物的paper 还笨笨的挑到地雷!! : 有一直很认真的再看 想到能问的人却不多>O< : 请各位高手高抬贵手拯救我於水深火热的seminar深渊 : 我不是不认真看paper 却怎样都无法理解这两各点 : 小女子位於台南这个很多美食的地方 : 拯救我的大大我可以邮寄好吃的食物给您~>O<~ --

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