悬浮细胞不建议用Calcium Phosphate Transfection 因为颗粒会沉淀 所以是贴附型的细胞效果好 Calcium Phosphate Transfection适用细胞其实不多(以下简称CP好了) 你可以去翻翻Current protocol 我印象中里面写蛮多的 通常最好用的是293T细胞 效率好的话我有到九成 不过是GFP啦 CP的方式其实效果variation很大 这不但是我的经验 也是Current protocol上写的 而且 我看你的方式 像是抄书上的 但书上的方式其实太传统 效果不见得好 反而是各实验室改良的Mix方式 效果会好很多 至於勉强用在悬浮细胞上 我干过 我养的细胞也是会有些贴在dish上 也尝试过去做CP transfection 当时若以293T为目标的效果可以到9成 但勉强以悬浮细胞做 GFP当control没一颗细胞是亮的 後来我发现我的细胞在HBSS中培养会全部贴在dish上 於是我兴奋的再做CP transfection 细胞全碎 除此之外 我们实验室曾拿过很多种细胞做CP transfection 校果大多没293T好 而且大部分都是很差(顶多4成) (Hela, Caski, H1299等) 不过如果你的plasmid可以用药筛或许没差 总之 不建议你试 尤其是悬浮细胞 效果奇差 硬要试的话 颗粒大小 换medium的时间都可以调 我加入CP plasmid Mix到细胞medium中 最短一个小时就换medium(complete) 第二天效果仍有7成 不过是293T就是 有的细胞很脆弱 两个小时换就死光光了 还有 有的书上说 Serum会影响transfection效率 虽然我觉得没差 最後 书上都写 Mix CaCl 和 HBS後要等几十分钟 其实...........我做到最後的经验是 根本不用等 颗粒细才是王道 不过 这东西真的很诡异 到各个实验室的结果都不大一样 我也有看过其他实验室做出比我大十倍有的颗粒 细胞没死 效果也很好 真是天杀的不知所以然 光transfection我就试了好几个月 两年下来 我对这方法还是一整个不喜欢 即使在熟悉的实验室 用同样的buffer medium 我都不能保证我每一次细胞都不会碎 也许是我们的方法也不好吧 只能说 原po得多试多问了 --

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