作者hird (无底洞)
看板Biotech
标题[求救] run SDS-PAGE速度太慢
时间Mon Jan 8 23:25:53 2007
请教板上各位高手 我最近在跑SDS-PAGE时发现我的电泳速度太慢
我们家是跑大片胶(13*15) 10%的gel大约跑56V 16hr可transfer
我之前跑都很ok 最近不晓得到底哪里有问题 跑O/N之後早上来收还剩一大段
冲100V还是要跑个两三个钟头才有办法transfer 换过running buffer还是一样
可是acrylamide是新配的而且有借人跑过OK APS也是用之前就配好分装冰-20的
10%SDS也是之前用过OK的 胶体凝固的速度也正常 看起来也OK
WB出来的DATA看起来也是一切正常 markerOK protein看起来也不坏
就是除了跑电泳的速度变很慢之外似乎都没什麽差异
我唯一想得到的是我的1.5M Tris pH8.8 可能pH值有变 可是重新测过 pH=8.80
也重新过滤 问题还是没有解决
我在想Tris buffer在调pH值要注意室温 我们家最近冷气开很强 室温都在20度以下
我的Tris buffer是差不多在17度的时候测到pH=8.80 这样会有差别吗??????
或者我还有哪里没有注意到的 能否麻烦各位高手指点一下 感激不尽
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都跑那麽久了还剩那一大段 那我整天就顾那个PAGE就好了不就什麽事情都不用做
再算个transfer跟做WB的时间 一天根本做不完 生DATA的速度变慢 我皮绷很紧阿><
呜~~~到底发生什麽事了阿.....orz
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曾经发生过的事情 不会忘记
只是想不起来而已.........
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 218.161.100.164
1F：推 CCM:看看电路接头有没有问题...? 01/08 23:51
2F：推 hird:应该OK 因为大家都用同样的系统只有我的会这样 01/08 23:56
3F：推 alaric:好像跟我的, 最近也是如此. 我是定电流的, 就加大电流. 01/09 01:31
4F：→ alaric:明天跑完, 再告诉你, 变成如何. 01/09 01:32
5F：推 lolity:检查一下gel的两侧是否跟spacer密合，有缝隙的画会造成 01/09 06:25
6F：→ lolity:电压/电流不从gel通过，於是完全跑不动。 01/09 06:27
7F：推 brt:定电压的话 应该会观察到电流值突然变小. 01/09 11:01
8F：推 pacity:我有遇过power supply不够力的状况 若有其他台可以换换看. 01/09 13:43
9F：推 alaric:不是室温,也不是buffer的问题,比较像是power supply不够力. 01/10 01:14