作者iceoo (醉心於巴黎)
看板Biotech
标题Re: [问题] 关於Ni2+ column
时间Thu Jan 11 00:45:52 2007
※ 引述《iceoo (醉心於巴黎)》之铭言：
: 请问一下 在用imidazole洗纯化之蛋白质的时候
: 因为用1M imidazole去洗还是得不到我要的蛋白质
: (用SDS-PAGE没压到 但pri-bind有压到)
: 所以就再提高imidazole的浓度 当提高到2M时
: 在洗的过程中 带有Ni2+的 resin逐渐由绿色转为紫色
: 请问是为什麽呢 我再用PBS wash後 又恢复成绿色了
: thx!
推 Bluecold:pH? 01/10 06:49
推 aggaci:没结合上去吧?通column前後，target protein量有改变吗? 01/10 14:19
推 wensing:用到1M imidazole相当高浓度！ 01/10 18:00
→ wensing:我只用300mM就可以洗下来了！ 01/10 18:01
推 alaric:你的cell extracts有表现? 01/10 21:27
谢谢各位的回答 应该有结合上去 我的蛋白质是可溶的
破菌後上清液(un-bind)是有表现的 菌液用column bind O/N後 流出来的液体(pri-bind
)target protein量有变少很多(coomassie和Western都一样结果 虽然很难
去估计pri-bind和un-bind load的protein是否等量)
所以我推测应该是有bind 只是没冲下来...而且column为什麽会变成紫色呀
我有去找可是找不到答案 很诡异...
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莫听穿林打叶声，何妨吟啸且徐行。
竹杖芒鞋轻胜马，谁怕？一蓑烟雨任平生。
料峭春风吹酒醒，微冷，山头斜照却相迎。
回首向来萧瑟处，归去，也无风雨也无晴。
~~~《定风波》~~~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.230.71.161
1F：推 cyken:cell extract ? soluble fraction? 破菌後有离心取上清吗？ 01/11 00:49
已修正 THX!
※ 编辑: iceoo 来自: 61.230.71.161 (01/11 00:59)